肉苁蓉总苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织兴奋性氨基酸作用

(湖北民族学院医学院，湖北恩施445000)

摘要:目的观察肉苁蓉总苷( GCS )对SD大鼠脑缺血及再灌注损伤与脑组织兴奋性氨基酸(EAA)的影响。方法将SD大鼠经肉苁蓉总苷处理后，建立大鼠脑缺血再灌注模型，观察肉苁蓉总苷对脑组织中天冬氨酸(Glu )、谷氨酸(Asp，r-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)含量的影响。结果肉苁蓉总苷能够降低SD大鼠脑缺血再灌注后脑织Glu的含量。结论肉苁蓉总苷抗缺血性脑损伤的作用机制可能与其对抗脑缺血及再灌注后 EAA的升高有关。

关键词:肉苁蓉总苷;兴奋性氨基酸;脑缺血;再灌注

近年来，兴奋性氨基酸(EAA)和老年痴呆发病以及学习记忆的密切关系已引起重视。许多证据表明EAA的神经毒J胜作用，尤其是异常升高的谷氨酸(Glu )在阿尔茨海默病(Alzheimer , disease , AD)的发生，发展过程中起着极为重要的作用，苁而为老年痴呆防治药物的研究开辟了新的途径[1~3]。肉苁蓉总苷( GCS )对小鼠脑缺氧有保护作用，对小鼠学习记忆有促进作用，对小鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用，能有效地清除各种活性氧自由基和保护经基(OH)引发的DNA氧化损伤等[4]。本课题采用高效液相色谱技术对肉苁蓉总苷

对大鼠脑缺血再灌注后脑组织兴奋性氨基酸含量进行测定，苁而探讨肉苁蓉总苷改善脑功能的作用机制。

1材料与方法

1.1试验药物苁蓉总苷，杏辉天力(杭州)药业有限公司，批号:20081516，用时生理盐水配制。

1.2动物SD鼠60只，体重(20. 0士1.9)g，雌雄各半，由湖北省实验动物中心提供。

1.3试剂与仪器谷氨酸(Glu )、天冬氨酸(Asp ) ,氨基丁酸(GABA),，一甘氨酸(Gly)标准品均为美国Sigma公司产品，纯度99.9 %(质量分数)，其它试剂均为国产分析纯;TG328A型电子分析天平、R E-S2型旋转蒸发器、仪器包括GL-20A型高速冷冻离心机(湘仪总厂离心机厂)、LC-6A高效液相色谱仪和RF-530荧光检测仪(日本岛津)。

1.4动物模型的建立SD大鼠随机分为假手术对照组(A组)、缺血模型对照组(B组)、缺血加肉苁蓉总苷药液组(C组)、缺血再灌注模型组(D组)、再灌注加肉苁蓉总苷原方组(E组)。缺血加原方组和再灌注加原方组均腹腔注射(ip)肉苁蓉总苷药4. 0 g·kg-1’;假手术组、缺血模型组和再灌注模型组均ip等容量生理盐水，连续给药2d。大鼠连续灌胃2d后，第3天以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型(缺血15 min，再灌注48 min)。10%水合氯醛(350 g/100 g)腹腔注射麻醉大鼠后，分离右颈总动脉并剪一小口，将直径0. 215mm国产尼龙线头端烧成光滑柞状(直径0. 26~0. 3 mm)插人，以颈总动脉分叉处计算进线深度为(18. 0土0.5)mm，至大脑中动脉起始部以完全阻断血供。再灌注时外托尼龙线，即可恢复颈内动脉及大脑中动脉的血液供应。模型成功的标志是大鼠出现右眼Homer征;提尾时左前肢内收屈

曲;爬行时向左侧倾倒或按逆时针方向转圈。假手术组除不插人线栓外，其他操作步骤同上[5~9];

1.5观察指标及方法大鼠经再灌注48 min后，断头切取大脑皮层在冰浴下，按照40 g·L-1’比例，用浓度为0. 02 mol·L一’的盐酸，制作脑组织匀浆，置于10 000 r·min-1’离心15min，取上清液，采用高效液相色谱法进行分析。

1. 6   HPLC分析条件LC-6A高效液相色谱仪，Nova-pakCia(150 mm x4 mm,5 N,m)，流动相:50 mmol·L-1’醋酸钠:甲醇:THF(A,82:17:1)，流动相:50 mmol·L-1’醋酸钠:甲醇:THF ( B , 22: 77 : l)，流速:1 ml·min-1’，柱温:27℃，检测波长:425 nm，进样量:100µl，梯度条件见表1 [5]。

1.7统计分析各组数值用(x士:)表示，采用SPSS13. 0软件对数据进行ANNOVA单因素方差分析，P<0.05和P<0. 01认为有显著性和高度显著性的统计学意义。

2结果

2.1各组脑组织Glu含量比较表1显示，缺血15 min后，B组脑组织Glu含量高于A组(P<0.05);C组织Glu含量低于B组(P<0.05)，与A组间差异无显著性(P>0.05)。再灌注48 min后，D组脑组织Glu含量高于A组(P<0.05)，与B组比较差异无显著性(P>0.05);E组脑组织Glu含量低于D组(P<0.05)，与A组比较差异无显著性(P>0.05)

2. 2其他氨基酸在各组脑组织的含量比较表I显T,I徐B组及D组脑组织Asp}GABA含量高于A组(P<0.05或P<0. 01)外，其他各组比较均无显著性(P>0.05);各组脑组织Gly含量比较，差异均无显著性(P>0.05)

3讨论

兴奋性氨基酸是重要的神经递质，广泛分布于中枢神经系统内。已有文献报道表明，脑缺血再灌注时，能够引发兴奋性氨基酸在脑组织中的含量明显增高。这是由于脑缺血再灌注时，脑组织中的神经元去极化，神经细胞摄取兴奋性氨基酸的能力严重受损，苁而使得细胞外兴奋性氨基酸的含量明显增高[11~13]

本研究结果显示，肉苁蓉总着能够显著降低大脑皮层兴奋性氨基酸的含量。由此可得出如下结论:肉苁蓉总苷对于急性局灶性脑缺血再灌注大鼠所引发的病理过程具有确切的干预作用，其作用机制之一是通过调节大脑皮层兴奋性氨基酸含量来实现的。