三七三醇皂苷对大脑中动脉梗塞大鼠行为学

三七二醇皂昔对大脑中动脉梗塞大鼠行为学病理形态学及血清白细胞介素一6的影响

摘要:目的:探讨三七三醇皂苷对大鼠脑梗死后不同恢复时点相关病理门理改变及对血_清白细胞介素-6(工L -6)水平的形响。力一法:采用线栓法制备大脑中动脉梗塞大鼠模型啊ACO)，研究三七三醇皂苷对大脑中动脉梗塞大鼠脑缺血_后不同时问点的行为障碍、缺血_组织病理形态及血_清白细胞介素-6水平的Y响。结果:阻}析大脑中动脉后3d内，所有大鼠都出现程度不同的运动障碍，血_清工L-6水平显著川高。三七三醇皂苷可减轻MCAO大鼠神经功能损伤表现，部分改善其活动度，明显抑制其血_清中工L-6水平。结论:三七三醇皂苷能有效抑制级联反应中炎性细胞囚了几-6的产门，减轻或消除脑缺血_级联反应中的炎乡l补反应，发挥保护神经兀的作用。

关键词:三七三醇皂苷 脑梗死 白细胞介素-6 大脑中动脉梗塞大鼠模型 实验研究

Effect of PTS on praxiology, pathomorphology and serum IL一6 in rats with middlecerebral artery occlusion

ZOU Wei-meng, ZHA工.Jian wing, CU工Fang yuan, WANG Xi-ling, ZHU Ling-qun, ZOU Yi-huai(Dongzhimen Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100700, China)Abstract: Objectivee To investigate the effect of PTS on the related pathophysiological changes and serum ILr6 levelat different time points after the middle cerebral artery occlusione MCAOe in rat's brain. Methodse The model of focal cerebralischemia of rat was established by the suture-occluded method.The effect of PTS on the behavioral disturbance，the pathologicalchange of ischemia tissue and the level of serum IL-6 at different time points(3d,7d,28d) after MCAO and cerebral ischemia inrats were studied. Resultse After MCAO,different degrees of motion disturbances were observed in all rats. The infarct spot canbe observed in all groups except the normal. The nerve cell necrosis can be found in all rats after 24 hour of MCAO. The resultshowed that PTS could improve the degree of motion disturbance ,reduce the infarct spot obviously; after MCAO, the serumILr6 were increased obviously but could be reduced by PTS. Conclusione PTS can protect the neurons，reduce and eliminate theinflammatory reaction of cerebral ischemia cascade reaction effectively, which may relate to its inhibiting effect on cell factorssuch as ILr6 production after cerebral ischemia

Key WOrdS: PTS; Cerebral ischemia; IL-6; MCAO; Experimental study

中药三七活血化淤而不伤正气，用十脑梗死的临床治疗取得了较好疗效。木研究通过观察三一L提取物三一L三醇皂昔(P T S)在不同时一间点对大脑中动脉梗塞大鼠模型(m fiddle cerebral artery occhtsion,M CAO)的行为学、病理形态学和抑制炎性介质方ICI的影响，探讨PTS促进脑梗死后功能恢复的机制，为治疗脑梗死后不同时一点的作用提供新的实验依据。

材料和方法

1.实验动物健康雄性SD大鼠105只，体质量0300士20} g,清洁级，购自北京维通利华实验动物技术有卜良公司，许可证号:SCX K(京)2002-00030

2.药物与试剂三七通舒胶囊:成都华神集团股份有限公司制药)一生产(国药准字220030109;产nuu批号:061002 X H 021;规格:何粒200m g，含PTS 100m g)。尼莫地平片:天津市中火药业有限公司生产(Ir}药准字H 200439150;产uu扎匕号:060608;规格:何)'; 30m g)。R at IL-6 E L ISA试剂盒:美国加利弗尼业州R ap i}l B io L ab产u (C a七N o.3R 035，产uu扎匕号:10090522)，购自尚柏生物医学技术(北京)有n}公司。

3.仪器与设备SPO T-II数码成像系统((d iagn-ostic instsum tints公司);石蜡切片机(德国L eicaR M 2135);光学显微镜(日木OLYMPUS BX60型);128C型C tin ih io全自动酶标仪;L D 5-2A型离心机(北京医用离心机)一)。

4.方法将大鼠称质量后随机分为正常组和手术组。手术组采用改良的L ongaT法制备M CAO模型。动物清醒后采用LongaI`分标准}o分:无神经功能缺损表现;1分:对侧前爪不能充分伸展;2分:向外侧转圈;3分:行走时一向对侧倾斜;4分:不能行走，息识丧失)进行神经功能评分，1-3分者一纳入实验，0分、4分者一剔除。将纳入的手术动物随机分为3组:模型组、PTS组和尼莫地平组。后两组动物自手术日开始，分别子三七通舒混悬液和尼莫地平混悬液灌胃。给药剂量按大鼠与人体表ICI积等效剂量折算，前者瓜4ui g 100扩子川I当十成人用量loom g 60kg 1 d-1)的10子R，后者(L.73m g 100g 1 cT1)}I I当十成人用量(120m g 60kg 1 d 1)的BTR}正常组和模型组动物自手术日开始给子去离子水灌胃。各组均何天给药1次，何3天称体质量1次以币新}I-算给药量，十术后3d, 7d和28d三个时一间点分别取材。观察各组大鼠术后5h, 1d, 2d, 3d时一的L onga七}`分和术后当日、3d, 7d, 28d时一的活动度变化。术后3d, 7d, 28d分别取各组大鼠7只，麻醉后腹卞动脉采血，3 000响in离心10m in汾离血清，-200C冻存，采用酶联免疫吸附法((E L工SA)测定血清几-6;用恒流泵依次灌注生理盐水200m 1, 4%多聚甲醛200m咽定脑组织，切片脱水浸蜡包埋，常规HE染色，光镜观察。

5.统计学方法采用SPSS10.0 fouwindows统计分析软件，所有实验数据以z士、表不，组间均数的比较经方差齐性检验后以单因素方差分析统不}一结果。

结果

1.行为学观察

1.1神经功能评分见表1。大鼠M CAO术后多十1-3h内清醒。术后5h神经功能缺损症状较币，L onga评分较高，术后48h缺损神经功能有所恢复，L onga评分呈下降趋势，术后72h PTS组和尼莫地平组L onga}`分显著低十模型组，差异有显著统不l一学b,义中<0.01) o

1.2一般状态正常组大鼠精神好，反应灵活，活动度大。其余各组术后3d精神均较差，反应迟钝，扎堆蜷缩;术后7d模型组精神、反应及活动度仍较差，PTS组和尼莫地平组的状态有一定好转，活动度较大，无扎堆蜷缩;术后28d，各组大鼠的一般状态均接近正常，活动度无明显差异。

2. HE染色光镜检测结果正常组的皮层细胞形态正常，核仁清楚，神经细胞数量多，排列整齐，形态完整。术后3d时一，模型组皮层组织梗死中心区神经儿、胶质细胞和血管大量坏死，可见少量皱缩神经少:和小胶质细胞、细胞骨架消失或严币破坏，组织结构疏松呈筛网状，软化灶明显，梗死灶周边区部分神经少:肿胀，胞浆伊红着色变浅，形态变圆，体积增大，分布不均，另一部分神经儿浓缩，核周质浓缩着色较深，被空泡的神经纤维围绕，神经儿形态变为多角形或扇形，血管可见粒细胞附壁及浸润;PTS组与尼莫地平组的梗死范围明显小十模型组，梗死边缘组织结构未完全破坏，残存神经儿较多，周围散在胶质细胞增生，神经儿、胶质细胞和血管大量变性坏死等缺血性改变和炎性反应明显轻十模型组。术后7d时一，模型组较术后3d时一的表现有好转趋势，胶质细胞增生，细胞数目有所增多。术后28d时一，模型组胶质细胞明显增生，细胞数目增多。PTS组与尼莫地平组术后7d, 28d时，病理形态改变显著轻十同期模型组。

3.血清II. - 6水平见表2。模型组血清IL-6水平随着病程的延长呈下降趋势，术后28d与该组术后3d比较显著降低(p<0.05),但在3个时一间点均高十正常组(P<0.01) o PTS组和尼莫地平组IL.-6的水平随时一间的变化趋势与模型组相似，术后7d和28d与自身术后3d比较显著降低，有统不l一学息义。日‘PTS组和尼莫地

讨论

木实验通过研究脑梗死大鼠功能损伤、恢复动态过程中的脑保护机制和促康复因素等，为PTS用十脑梗死的临床治疗提供了一定实验依据。

1.行为学变化

1.1神经功能评分术后3d, PTS组和尼莫地平组L onga评分显著低十同组术后5h盼药前)评分，较同期模型组下降速度快，说明两组均能改善脑梗死后大鼠神经功能;术后7d各组大鼠神经功能基木恢复，接近正常水下。以上实验结果说明，脑梗死后早期应用PTS对神经功能恢复有一定帮助，但其恢复机制具体为何，是否为促进了神经的再生，尚需进一步探讨。

1.2活动度的观察术后3d，各组手术大鼠活动度均较差，扎堆蜷缩;术后7d, PTS和尼莫地平组大鼠活泼性有明显改善，模型组状态较差;术后28d,各组整体状态均接近正常大鼠，无明显差异，提不药物干预可以加快M CAO大鼠整体状态的恢复。

2.病理形态学变化木研究所采用的HE染色能初步观察脑组织神经儿的病理改变。观察结果表明，PTS组与尼莫地平组对大鼠缺血的脑组织均有明显的促恢复作用，中西药治疗组与对应时一间模型组比较，神经儿缺血性损害程度明显减轻，卞要表现为皮质神经儿缺血性损害程度减轻，恢复速度加快。

3.血清IL.-6水平大鼠试验以及临床研究均已发现在脑缺血级联反应中，有多种细胞因子参与，局部的炎症反应导致脑缺血缺氧时一脑细胞的损伤和坏死，同时一全身血液循环中炎症因子也出现相应的变化Ci-s l o是具有多项功能的细胞因子，卞要由T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、内皮细胞产生，在脑组织中产生IL.-6的细胞是星形细胞和小胶质细胞0研究已证实在脑缺氧缺血模型中IL.-6具有神经保护作用[n, s7但工L-6产生过多又可加币脑细胞损伤。研究表明，缺氧缺血性脑损伤时一，颅内IL-6水平迅速增高、活性增强，导致脑细胞的水肿和坏死[[6-i]。陈雨振

研究证实IL-6水平同脑梗死体积和神经功能受损程度成正相关口，是脑损伤恢复期脑梗死体积的独立预测指标。木实验中模型组血清工L-6水平随着病程的延长呈下降趋势，术后28d与自身术后3d比较显著降低(p<0.05)，在3个时一间点均高十正常组(P < 0.01)。PTS组和尼莫地平组工L-6的水平随时一间的变化趋势与模型组相似，术后7d和28d与自身术后3d比较显著降低，日‘PTS组和尼莫地平组在各时一间点均显著低十同期模型组。升高的IL-6能刺激细胞间%k}l I }}}分子ICAM-1的合成，减少其抗体的表达，使炎性细胞大量聚集在病变区域，增加中性粒细胞在化学趋化因子的刺激下，释放氧自由基，与其他炎性细胞因子协同发挥细胞毒性作用[[8 ]而PTS和尼莫地平可以降低血清IL.-6水平，这可能是其抑制脑缺血级联反应中炎症过程、减轻脑缺血损伤的机制，为恢复奠定良好的基础。

综上所述，木实验研究认为，PTS对急性脑梗死具有较好的治疗效果，表现为:改善神经功能缺损症状;减轻缺血区神经儿损害程度;抑制脑缺血级联反应中炎症介质的表达等，为临床应用PTS治疗缺血性脑血管疾病提供了一定的实验依据。近年来，关十中药提取物治疗中风的研究蓬勃兴起，已在临床及多种大鼠模型上印证了中药的疗效，治疗中风的作用机制度也日见清晰。有研究表明PTS可以缩小脑缺血再灌注大鼠的梗死ICI积，抑制细胞凋亡[[8-9]。因此，PTS的作用机制可能为多水平、多通道、多靶点的综合效应，其对脑缺血损伤的神经保护、再生和币塑作用的实现途径尚待进一步研究证实。